Cell Reports|看“**神童”如何运用高通量筛选技术研究肿瘤

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Cell Reports|看“**神童”如何运用高通量筛选技术研究肿瘤 by 卡序生物

转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。然而，与寻找乳腺癌的原癌基因和抑癌基因突变不同的是，我们对乳腺癌转移的机制基础的理解仍然非常有限。

最近，来自美国的科学家们运用体内CRISPR筛选技术，寻找了与自噬相关的乳腺癌转移关键基因；CRISPR筛选技术是一种功能强大的筛选工具，其结合了传统实验技术和独特的生信分析手段，特别适用于探究与某个表型密切相关的基因。

● 文章及作者简介 ●

文章于2024年发表在Cell Reports期刊上，影响因子为8.8；研究团队是美国辛辛那提大学医学院的管俊林团队，该团队主要从事细胞信号通路在生物过程中的调控机制，以及正常信号通路的破坏如何导致癌症和其他疾病。

    

● 研究目的和思路 ●

研究目的：寻找与自噬相关，且与乳腺癌转移相关的基因；；

研究思路：利用小鼠原位癌模型，结合CRISPR筛选技术，寻找敲除能够导致乳腺癌发生转移的基因。。

● 主要研究内容 ●

为了寻找与自噬和乳腺癌转移都相关的基因，研究团队首先采用自定义文库的方式选择了171小鼠自噬相关基因，并构建了1026条靶向这些基因的sgRNA和100条对照sgRNA作为本次CRISPR筛选的文库。在细胞选择上，研究团队选择了MMTV-NEU小鼠来源的N148细胞系（HER2阳性）作为在裸鼠上诱导原位乳腺癌的“种子”细胞，并将文库导入上述细胞，随后发生基因敲除。值得注意的是，通常情况下，原位的N148细胞不会发生肺转移，因此，研究团队假设某些基因敲除后，乳腺肿瘤将发生肺转移，则该基因为乳腺癌肺转移的抑制因子。

沿着这一思路，研究团队最终寻找到P47基因，该基因既是自噬调控基因，又是乳腺癌肺转移的抑制因子；随后，研究团队对该基因在肺转移癌中的功能进行了初步验证，发现该基因的表达和肺转移呈现负相关。

 

体内CRISPR筛选揭示自噬调节基因p47是乳腺癌转移抑制基因

随后，研究团队又进一步地研究了P47在癌细胞中所发挥的功能；实验结果显示，P47缺失在体外实验中能够增加乳腺肿瘤细胞的迁移，而在体内实验中，敲除P47能够增加肿瘤细胞的肺转移。

P47缺失增加了乳腺肿瘤细胞的体外迁移和体内肺转移

后续，研究团队对P47涉及的相关信号通路进行了较为系统的研究，主要涉及NF-κB、溶酶体降解图集及自噬流调控等过程，有兴趣的小伙伴们可以点击文末的“阅读原文”按钮进行详细阅读。

我司已开发CRISPR筛选研究相关技术（自定义文库、CRISPR-CAS9系统导入、sgRNA测序分析），有需求的朋友可以通过文章末尾的联系方式与我们进行沟通交流！！！

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